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(12)PCR實(shí)驗(yàn)中試劑為什么會(huì)蒸發(fā)?甚至蒸干？怎么辦？
時(shí)間：2024-07-26 來(lái)源：EASTWIN瀏覽次數(shù)：148
龍龍：試劑的蒸發(fā)是PCR實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的問(wèn)題之一，影響試劑蒸發(fā)的因素也比較多。
蒸發(fā)是指試劑在PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，反應(yīng)液在高溫下氣化，又凝結(jié)在管壁或頂蓋上，形成水霧或水珠，或直接從管蓋或覆膜的氣隙中逸出，造成反應(yīng)液濃度變化、反應(yīng)液量減少，有的甚至蒸干，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)效等。
在PCR實(shí)驗(yàn)中，我們一般通過(guò)加熱蓋的辦法來(lái)防止試劑蒸汽的凝結(jié)，熱蓋溫度一般比反應(yīng)液的溫度高，以防止蒸汽凝結(jié)。
對(duì)于蒸汽的泄漏，大部分人認(rèn)為是熱蓋的壓力不夠所致。熱蓋的壓力固然很重要，但這僅僅是一個(gè)方面，其實(shí)耗材也很關(guān)鍵。
優(yōu)質(zhì)的試管，管口和蓋子表面光滑，盒蓋后密封性好，不易泄漏。而劣質(zhì)耗材，管口不平，有徑向紋路，容易造成泄漏，甚至蒸干。
對(duì)于小體系（5-10ul）的PCR反應(yīng)，大多采用96孔板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。96孔板一般都采用覆膜的方式來(lái)密封，也有用硅膠蓋的。如果是覆膜，塑料膜的材質(zhì)、厚薄、硬度、覆膜的溫度、壓力、平整度等都有影響。一般選擇質(zhì)地柔軟的、厚度較厚的膜較好。為了增加管口的密封壓力，還可在熱蓋上增加一個(gè)柔軟的、帶96個(gè)凸起的硅膠墊。
另外，PCR程序的參數(shù)設(shè)置也很重要，要選擇與實(shí)際反應(yīng)體系最接近的反應(yīng)體系。如：實(shí)際反應(yīng)體系是5ul，如果在程序設(shè)置時(shí)選擇了25ul、甚至50ul，那么，試劑在95℃裂解時(shí)的溫度過(guò)沖大，且動(dòng)態(tài)溫度平衡時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。這實(shí)際上是提高了試劑的溫度（可能達(dá)到98℃），并且延長(zhǎng)了在高溫段停留的時(shí)間，大大增加了試劑泄漏的風(fēng)險(xiǎn)，甚至使試劑完全蒸發(fā)（蒸干）。
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